引言

干热灭菌是医疗、制药、生物技术等领域中常用的灭菌方法，其通过高温（通常160°C以上）破坏微生物的蛋白质和核酸结构，从而实现彻底灭菌。为确保灭菌过程的有效性和可靠性，生物指示物（Biological Indicators, BIs）被广泛用于验证灭菌程序的性能。干热灭菌用生物指示物通常由耐受性极强的嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）孢子制成，其检测与控制直接关系到灭菌工艺的合规性。

检测范围

干热灭菌用生物指示物的检测适用于以下场景：

• 制药行业：无菌药品生产中的灭菌工艺验证；
• 医疗器械：植入物、手术器械等高温灭菌设备的性能确认；
• 实验室研究：新灭菌工艺开发及优化；
• 质量监控：灭菌设备日常运行中的周期性验证。

检测项目

干热灭菌用生物指示物的核心检测项目包括以下内容：

• 存活菌数测定：确认每单位生物指示物中活孢子的初始数量；
• D值测定：评估孢子在特定温度下的耐热性，即杀灭90%微生物所需时间；
• 存活时间（ST）与杀灭时间（KT）：验证灭菌工艺是否能实现孢子完全灭活；
• 稳定性测试：考察生物指示物在贮存期间的性能变化；
• 抗干扰性测试：确保孢子对灭菌环境（如湿度、包装材料）的耐受性。

检测方法

根据ISO 11138-4标准及其他行业规范，干热灭菌用生物指示物的检测需采用以下方法：

• 存活菌数检测法：将生物指示物在非灭菌条件下培养，通过菌落计数法统计活孢子数量；
• D值计算法：采用多组暴露时间的存活数据，通过线性回归法计算D值；
• 存活-杀灭时间测试：将生物指示物置于灭菌设备中，逐步延长灭菌时间，观察孢子存活情况；
• 加速老化试验：在高温高湿环境中模拟长期贮存，评估生物指示物的稳定性；
• 分子生物学方法：利用PCR技术检测孢子DNA损伤程度，辅助验证灭菌效果。

检测仪器与设备

为确保检测结果的准确性和可重复性，需配置以下关键仪器：

• 恒温培养箱：用于孢子复苏及存活菌数培养，温度精度需达±0.5°C；
• 干热灭菌柜：提供标准化的灭菌环境，需具备温度均匀性验证功能；
• 菌落计数器：自动化统计培养后的菌落数量，减少人为误差；
• 热穿透测试系统：实时监测灭菌过程中生物指示物内部温度变化；
• PCR仪：快速检测孢子DNA完整性，用于辅助灭菌效果评估。

检测流程的关键控制点

在实际检测中，需重点关注以下环节：

• 样品预处理：避免因操作污染导致存活菌数偏差；
• 温度均匀性验证：确保灭菌柜内温度分布符合ISO 17665要求；
• 数据记录完整性：详细记录暴露时间、温度曲线及培养结果；
• 阳性对照设置：每次检测需包含未灭菌的生物指示物作为对照。

结论

干热灭菌用生物指示物的检测是保障灭菌工艺有效性的核心环节。通过标准化的检测项目和方法，结合高精度仪器设备，能够全面评估生物指示物的性能参数。未来，随着快速检测技术和智能化设备的应用，检测效率与准确性将进一步提升，从而为医疗安全和产品质量提供更坚实的保障。

需要强调的是，检测过程中必须严格遵循国际标准及质量控制规范，确保检测结果的科学性和性。行业从业者应持续关注技术更新与标准修订，以应对日益复杂的灭菌工艺挑战。

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